FAS活性測定中標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立是實(shí)驗(yàn)的核心環(huán)節(jié)，直接關(guān)系到結(jié)果的準(zhǔn)確性。
一、標(biāo)準(zhǔn)曲線建立步驟
?標(biāo)準(zhǔn)液濃度選擇?
建議選擇5種濃度，覆蓋待測樣品的可能變異范圍，濃度差距最好成倍或等級增加。
例如：0.8 IU/ml、4 IU/ml、20 IU/ml、40 IU/ml、50 IU/ml（參考ELISA試劑盒檢測范圍）。
?標(biāo)準(zhǔn)液測定?
每個濃度點(diǎn)至少重復(fù)2次，讀取光密度（OD值）并取平均值，以減少儀器誤差。
?標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制?
以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
若符合Lambert-Beer定律，曲線應(yīng)通過原點(diǎn)且為直線；若點(diǎn)不在一直線，可通過原點(diǎn)盡可能使直線通過更多點(diǎn)，使點(diǎn)均勻分布在直線兩側(cè)。
二、標(biāo)準(zhǔn)曲線核心要求
?濃度范圍?：應(yīng)覆蓋正常操作條件下的被測量范圍。
?標(biāo)準(zhǔn)樣品組分?：盡量與被測樣品組分一致，減少基體干擾。
?濃度分布?：標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度值應(yīng)等距離的分布在被測量范圍內(nèi)。
?重復(fù)性?：每個標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)至少重復(fù)2次，從稀釋開始。
三、注意事項(xiàng)
?儀器與試劑?：更換儀器、移動位置、調(diào)換試劑或室溫明顯改變時，需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
?標(biāo)準(zhǔn)曲線保存?：繪制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線僅適用于相同條件下操作測定相同物質(zhì)時使用。
?結(jié)果計算?：以標(biāo)準(zhǔn)物活性為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品OD值查得活性，再乘以稀釋倍數(shù)。
四、示例標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)
?檢測范圍?：0.8 IU/ml - 50 IU/ml。
?線性回歸?：樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值應(yīng)≥0.99。
?批內(nèi)與批間差異?：批內(nèi)CV值應(yīng)<9%，批間CV值應(yīng)<15%